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上海起發自產線性PEI轉染試劑

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產品型號:
78pei25000
產品報價:
產品特點:
上海起發自產線性PEI轉染試劑

PEI轉染注意要點

化學名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉染級

訂貨號#: 9002-98-6 規格:1G 品牌:BIOHUB CAS#: 9002-98-6,26913-06-4

分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000
  78pei25000上海起發自產線性PEI轉染試劑的詳細資料:

 

上海起發自產線性PEI轉染試劑說明書

PEI轉染注意要點  

化學名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉染級

訂貨號  9002-98-6   規格:1G  品牌:BIOHUB       CAS  9002-98-6,26913-06-4        

分子式:(CH2CH2NH)n      分子量: 25,000      熔點: 73-75º 

溶于:熱水,低pH冷水,甲醇和乙醇。    不溶于:苯,乙酉迷和丙酮   

外觀:白色至黃色固體       處理手套和通風櫥

儲存:在室溫下避光干燥儲存

配置:1:稱取100mg線性聚乙烯亞胺,加新鮮的細胞級別的水90ml,加鹽酸至PH=3左右, 加熱至80℃左右攪拌過夜溶解PEI,

2:用氫氧化鈉溶液調整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的濾器過濾,分裝后儲存于4℃,保質期可以達到12個月。

轉染操作流程:

◆ 瞬時轉染方法  1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養箱中 37下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

穩定轉染方法

1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養箱中 37下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

5.轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養箱中 37孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。  

上海起發自產線性PEI轉染試劑特別提醒

1PEI 25K含有4-11%的殘留丙?;?,這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結合,所以批間轉染效率可能會有比較大的差異,建議一個批次可以多購買,PEI 25K穩定性在室溫干燥避光下可穩定保存10年以上(雖然有效期標注只有18個月左右)

2. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著 提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為 70~80%。

3. 對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

4. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養基以達到最宜轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。

5. 對大多數細胞來而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉染試劑進行優化。

6.本手冊只是一個基本操作手冊,具體轉染過程中需要根據實驗進行優化,優化方向為混合時間,轉染時間,DNA混合比列.......

7.Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 為Polysciences公司生產的化合物產品,每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩定且高品質,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準度,dna RNA純度,細胞狀態,細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復,對于產品產品轉染效率不高,轉染批間有差異,轉染不了等問題,不作為評價我們售后工作的依據。
    如果我們提供的PEI手冊都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻,多調整一下轉染條件,找出適合自己細胞的轉染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們配置好細胞轉染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解

8.部分數據參考,本數據來源于網絡,不作為售后投訴依據

上海起發自產線性PEI轉染試劑轉染試劑和DNA配比數據

細胞型號

培養基

每孔細

胞數

DNA的量

轉染試劑量

和培養基混合 4-6h

293H

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

293FT

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

293E

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

293F

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

COS7

DMEM

1.5×104

0.4µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

hela

DMEM

2×104

0.3µg

0.5µL

1640+15%FBS

Caco2

MEM

3.5×104

0.3µg

0.75µL

MEM+10%FBS

BHK21

MEM

2×104

0.2µg

0.5µL

MEM+10%FBS

CHO-DG44

DMEM+HT+pro

2×104

0.5µg

0.5µL

DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat

2×104

0.1µg

0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10%FBS

SW480

IMDM

3×104

0.4µg

0.5µL

IMDM +10%FBS

MDCK

DMEM

4×104

0.6µg

1µL

DMEM+10%FBS

CHO-K1

IMDM+Pro

3×104

0.2µg

0.5µL

IMDM+Pro +10%FBS

HepG2

DMEM

3×104

0.5µg

0.75µL

DMEM+10%FBS

A549

DMEM

2×104

0.3µg

0.5µL

DMEM+10%FBS

NIH/3T3

DMEM

1.5×104

0.1µg

0.75µL

DMEM+10%FBS

vero

DMEM

3×104

0.3µg

0.75µL

DMEM+10%FBS

sf9

SIM SF

5×104

0.4µg

0.75µL

SIM SF+10%FBS

轉染效率

細胞種類

中文名稱

PEI 轉染效率

HEK293

人胚腎細胞

90%-95%

293-T

人胚腎細胞

90%-95%

CHO-K1

倉鼠卵巢細胞

80%-90%

U251

人源神經膠質瘤細胞

80%-90%

Hela

人源宮頸癌細胞

70%-80%

COS7

猴SV40轉化腎細胞

70%-80%

HepG2

人源肝癌細胞

70%-80%

NIH/3T3

小鼠胚胎成纖維細胞

60%-70%

膠質瘤干細胞

人源膠質瘤干細胞

60%-70%

Patu8988

人源胰腺癌細胞

60%-70%

U2OS

人源骨肉瘤細胞

60%-70%

上海起發自產線性PEI轉染試劑價格表

貨號

品名

規格

目錄價

品牌

23966-1

Polyethylenimine, Linear (MW 25,000)

1g

17085

polysciences

78pei25000線性聚乙烯亞胺 分子量25000500mg

  5000元

biohub
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產品相關關鍵字: 線性PEI 線性聚乙烯亞胺 聚乙烯亞胺 9002-98-6 26913-06-4
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